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酶的高效表达监测研究
图1 通过体内检测来分析BphK的替代底物。4-CBA浓度为1mM时,E.coli JM109 (pGEM)(■)细胞和E.coli JM109 (pNG4)(□)细胞的生长。E.coli JM109(pNG4)中克隆的bphK基因检测显示出较高的GST活性

论文:BphK基因对PCBs的bph-促降解终产物4-氯苯甲酸的脱氯活性 FEMS Microbiology Letters 2003, 222:251-255, IF= 2.068

研究背景: 1-氯- 2 ,4 -二硝基苯(CDNB)和谷胱甘肽一起作为谷胱甘肽S-转移酶反应的共底物。CDNB通过消耗细胞中的谷胱甘肽来抑制大肠杆菌的生长,在谷胱甘肽S-转移酶(GST)存在时这种抑制作用更加严重。

Bioscreen在本文中的作用: E.coli JM109(pNG4)中克隆的bphK基因显示出较高70倍的谷胱甘肽S-转移酶活性,用Bioscreen高通量监测菌细胞在CDNB存在下的生长来建立一种快速分析方法,以确定高活性谷胱甘肽S-转移酶是否存在。

通过体内检测来分析BphK的替代底物。4-氯苯甲酸(4-CBA)浓度为1mM时,E.coli JM109 (pGEM)(■,阴性对照菌株)细胞和E.coli JM109 (pNG4)(□)细胞的生长。如此,可以高通量筛选BphK的替代底物:替代底物存在时,大肠杆菌生长曲线呈平行直线形;替代底物不存在时,生长曲线呈正常S形。

延伸思维:可以应用于基因的高效表达监测研究、酶的高效表达监测研究。Bioscreen全自动生长曲线分析仪可以一次处理200个样本,而且自动化检测无需人熬夜,为高通量筛选大量样本的一种有效方法。
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